Plusieurs organes ou tissus de la plante (graines, apex, embryon, suspension cellulaire,..) peuvent être utilisés mais la graine offre divers avantages : (i) facilité d’obtention, (ii) facilité de régénération d’une plante entière, (iii) une grande majorité des variétés cultivées et certaines espèces produisent des graines avec des embryons somatiques additionnels à l’embryon sexué, permettant la multiplication clonale, (iv) absence de transmission de maladie via la graine. Cependant la graine des agrumes est considérée comme étant non-orthodoxe, c’est-à-dire qu’elle ne supporte pas des dessiccations sévères (< 8% d’eau) et des températures négatives (congélation). Il faut par conséquent mettre en place des protocoles adaptés pour préparer les graines à la congélation (dessiccation partielle pour éviter la formation de cristaux de glace au cours de la congélation tout en maintenant la capacité germinative).

Nous avons étudié plusieurs facteurs influençant le succès du processus de cryconservation:

1. La maturité des graines (capacité germinative) au cours du développement du fruit pour 3 espèces, Le taux de germination est maximum 3 à 4 semaines avant la taille du fruit atteint plus de 90% de son maximum et quand le contenu en eau des graines est inférieur à 60%.
2. La température de stockage ou d’incubation lors du séchage impacte la durée de la capacité germinative à 25°C les graines subissent un vieillissement accéléré plus ou moins rapidement selon l’espèce et selon leur teneur en eau. Cependant à 4°C les flux d’eau lors du séchage sont ralentis mais la capacité germinative est conservée plusieurs mois.
3. Il existe une grande variation de sensibilité/tolérance à la dessiccation chez les agrumes: le Poncirus qui perdent la totalité de la capacité germinative lorsque la teneur en eau des graines atteint 25%, les variétés acides (en parenté avec le cédratier) tolèrent des teneurs à 6%.
4. Le degré de dessiccation le plus favorable pour la congélation pour la majorité des agrumes est atteint avec des humidités relatives entre 75 et 81%. Ces résultats ont fait l’objet d’une présentation au congrès ISHS à Angers du 15-20 aout 2022 et d’un article dans Acta Horticulturae (sous presse) et d’un article en élaboration qui sera soumis à l’automne 2022. Une partie de la méthodologie de de cryconservation des graines avait été présentée dans un article sur la collection (Luro et al. 2018).

Références citées

Luro François, Franck Curk, Yann Froelicher and Patrick Ollitrault. 2018. Recent insights on Citrus diversity and phylogeny in AGRUMED: Archaeology and history of citrus fruit in the Mediterranean: Acclimatization, diversifications, uses. Zech-Matterne Véronique (ed.); Fiorentino Girolamo (ed.). Naples: Publications du Centre Jean Bérard, 2017; p16-28. ISBN: 9782918887775. DOI: 10.4000/books.pcjb.2107

Luro F., Tur I., Pailly O.  Behavior of seed tolerance to desiccation among citrus species: a crucial step for genetic resources cryopreservation. International Symposium on Integrative Approaches to Product Quality in Fruits and Vegetables Angers August 14-20 2022.